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ㆍCell Line Validation
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- Cell Line Validation
- Sterility test
- Mycoplasma test
- Retrovirus test
- Adventitious viruses
(In vitro assay)
- Adventitious viruses
(In vivo assay)
- Other virus testing
by real-time PCR
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Cell Line Validation
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시험소개
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세포은행으로 만들어진 세포기질의 특성결정과 시험은 생물의약품의 안전성,유효성 관리에 필수적인 요소이다.
세포주의 특성결정을 통하여 다른 세포주로부터 혼입된 세포, 외래성 오염인자, 내인성 인자 및 분자 오염원과 관련하여 세포기질을 평가할 수 있다.
이러한 시험의 목적은 세포기질의 확인, 순도 및 제조목적상 적합성을 입증하기 위한 것이다.
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적용범위
다음과 같은 검사물질에 대하여 세포주 특성 및 안전성을 확인하여야 한다.
ㆍ세포주 (Cell lines)
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ기타
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제공서비스
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1. Identity
ㆍDNA barcoding (CO1 or COX1 gene)
ㆍDetermination of cellular morphology and growth characteristics
ㆍNGS (Next-Generation Sequencing)
ㆍDNA fingerprinting by STR (Short Tandem Repeat) assay
ㆍKaryology
ㆍ18S rRNA amplification and sequencing
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2. Genetic Stability
ㆍCopy number by qPCR
ㆍSouthern blot
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3. Purity
ㆍSterility
ㆍMycoplasma (culture method, qPCR)
ㆍAdventitious viruses (In vitro assay)
ㆍAdventitious viruses (In vivo assay)
- Adult mice
- Suckling mice
- Guinea pig
- Embryonated chicken eggs
ㆍSpecies-specific viruses (qPCR test)
ㆍRetrovirus (PERT, TEM, Co-cultivation)
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4. 시험 완료 후 사후 관리
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※세포주 특성에 따라 시험항목이 달라질 수 있습니다
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A : 식품의약품안전처, 생물의약품 생산에 사용되는 세포기질 관리 가이드라인, 2010
B : 식품의약품안전처, 생명공학의약품 생산세포주 관리를 위한 시험방법, 2007
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Sterility test
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시험소개
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무균시험은 배양법에 따라 증식할 수 있는 미생물(세균 및 진균)의 유무를 확인하는 시험으로, 무균원료 및 멸균제품(의료기기, 의약품 등)에 대하여 시험을 수행할 수 있다.
배양기간 중 배지에서의 미생물의 증식 유무를 육안검사를 통하여 확인한다.
시험은 식품의약품안전처 고시 ‘생물학적제제 기준 및 시험방법’, USP 34 <71> ‘STERILITY TESTS’ 에 따라 실시한다.
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적용범위
다음과 같은 의약품 및 의료기기 제조과정 중 세포주, 배지, 공정물질, 및 최종제품 등에 대하여 무균시험을 수행해야 한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ공정을 거치지 않은 원료 (Unprocessed Bulk)
ㆍ연구용 세포은행 (Research cell bank)
ㆍ최종물질 (Final bulk, Final vials)
ㆍ의료기기의 멸균제품, 의약품의 무균원료 및 무균제제, 무균 소독제
ㆍ기타
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제공서비스
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1. 직접법 (Direct inoculation; immersion)
ㆍ호기성 및 혐기성 미생물 모두 검출 할 수 있도록 액상티오글리콜산배지와
대두카제인소화배지 사용
ㆍ배지의 적합성 및 측정법의 적합성 확인
ㆍ검체의 무균시험 - 접종 후 14일 동안 배양하며 미생물 오염여부 확인
ㆍ검체 필요량이 적으며, 쉽게 필터링 할 수 없는 검체에 대해 선호되는 방법
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2. 시험 완료 후 사후관리
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Mycoplasma test
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시험소개
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생물의약품의 제조에 사용되는 세포는 마이코플라스마를 포함한 adventitious agents가 없는 것으로 입증되어야 한다.
US FDA 의 “Points to Consider on the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals,”에서는 마이코플라스마의 오염 가능성을 배양법 (한천 및 액체 배지 시험방법)으로 평가해야 한다고 조언하고 있으며, 대체 시험법으로 핵산증폭시험(nucleic acid amplification test, NAT)이 있다.
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적용범위
생물학적제제, 유전자재조합의약품, 세포배양의약품, 세포치료제, 유전자치료제 등은 ‘약사법 ; 생물학적제제 등의 품목허가ㆍ심사 규정’에 따라 마이코플라스마 시험자료를 제출해야 한다.
다음과 같은 검사물질에 대하여 감염성 인자에 의한 오염이 없음을 검증하는 품질평가시험분석 결과를 요구한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ공정을 거치지 않은 원료 (Unprocessed Bulk)
ㆍ마스터 바이러스 시드 (MVS, master virus seed)
ㆍ제조용 바이러스 시드 (WVS, working virus seed)
ㆍ세포배양 원료 물질 (Cell culture raw materials - FBS, Trypsin etc.)
ㆍ최종제품 (Final products ; Production lot release)
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제공서비스
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1. 증균배양법(한천 및 액체 배지 시험방법)을 이용한 마이코플라스마
검출 시험(28일)서비스
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2. Real-time PCR을 이용한 마이코플라스마 검출 시험(200여종 이상 검출 가능) 서비스
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3. 다음과 같은 규제기관의 가이드라인에 따라 검증된 시험법으로 서비스를 제공
ㆍICH 가이드라인 Q2(R1)
ㆍ생물학적제제 기준 및 시험방법(식품의약품안전처 고시)
ㆍEuropean Pharmacopoeia (EP) Chapter 2.6.7 Mycoplasmas
ㆍJapanese Pharmacopoeia (JP) Chapter 2.6.7 Mycoplasmas
ㆍUnited States Pharmacopeia (USP) Chapter Mycoplasma Tests
ㆍFDA 1993 Points to Consider (PTC)
ㆍThe Code of Federal Regulations 21 CFR 610.30 test for mycoplasma
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4. 검증된 마이코플라스마 양성대조군 사용
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5. 시험 완료 후 사후관리
ㆍ마이코플라스마 검출 q-PCR kit 검증 시험 대행
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Retrovirus test
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시험소개
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레트로바이러스가 감염 후 역전사한 DNA는 숙주(세포) 게놈에 통합(integration)되며, 숙주의 증식과 함께 증폭이 되기 때문에 일반적인 방법으로 검출하기 어렵다.
따라서 레트로바이러스 등의 내인성 병원체 존재유무를 감염성시험법, 역전사효소 활성측정법 및 전자현미경관찰법 등의 적절한 방법으로 확인해야 한다.
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적용범위
다음과 같은 백신 제제(바이러스 제제)와 세포배양의약품에 대하여 레트로바이러스 등의 내인성 병원체 확인 시험을 수행해야 한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ공정을 거치지 않은 원료 (Unprocessed Bulk)
ㆍ마스터 바이러스 시드 (MVS, master virus seed)
ㆍ제조용 바이러스 시드 (WVS, working virus seed)
ㆍ세포배양 원료 물질 (Cell culture raw materials - FBS, Trypsin etc.)
ㆍ최종제품 (Final products ; Production lot release)
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제공서비스
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1. 전자현미경관찰법 (TEM, Transmission Electron Microscopy)
ㆍTEM을 이용한 세포주의 오염 여부 판별 시험은 미국 FDA와 유럽의 EEC에서
권장하는 사항이다.
ㆍTEM은 일반적으로 레트로바이러스(retrovirus A, B, C, and D type) 검출에
사용된다.
ㆍTEM은 바이러스나 바이러스 유사 입자에 의한 오염을 직접 육안으로 확일 할 수 있다.
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2. 역전사효소 활성측정법 [Product-Enhanced Reverse Transcriptase (PERT) assays]
ㆍRegulatory guidance (FDA, ICH)에서는 retrovirus particle 내에 존재하는
reverse transcriptase (RT) 활성을 이용하여 retrovirus의 오염 가능성을 확인하는
지표로 사용하기를 권고하고 있다.
ㆍ검사물질 내에 RT enzyme 활성을 cDNA합성과 PCR을 통해 확인함으로써
retrovirus particle의 존재유무를 확인한다.
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3. PG-4 S+L- cell plaque assay
ㆍXenotropic, amphotropic retrovirus에 감염되었을 때 PG-4 S+L- 세포가
세포병변 현상을 일으키는 것으로 오염여부를 판단한다.
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4. 시험 완료 후 사후관리
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In vitro assay
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시험소개
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In vitro assay는 사람 바이러스 및 관련 동물 바이러스를 광범위하게 검출할 수 있는 지표 세포에 검사물질(test article)을 접종하여 수행한다.
외래성 바이러스 In vitro 시험에 대해 ‘ICH 가이드라인, Q5A’에서는 인간 유래 바이러스에 민감한 인간 유래 세포주 혹은 영장류 세포주를 지표세포(indicator cells)로 사용할 것을 권장하고 있으며, 세포병변효과(cytopathic effect, CPE), 혈구흡착반응(hemadsorption, HAD), 혈구응집반응(hemagglutination, HA)로 분석할 것을 제시한다.
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적용범위
다음과 같은 검사물질(세포기질 및 바이러스)에 대하여 감염성 인자에 의한 오염이 없음을 검증하는 품질평가시험분석 결과를 요구한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ대조세포배양 (Control cell)
ㆍ마스터 바이러스 시드 (MVS, master virus seed)
ㆍ제조용 바이러스 시드 (WVS, working virus seed)
ㆍ바이러스 주 (virus seed or viral seed)
ㆍ바이러스 부유액 (virus harvest)
ㆍ기타
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제공서비스
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1. 외래성 바이러스 부정시험 (세포배양 접종시험) 서비스
ㆍ세포병변효과 (CPE, cytopathic effect)
ㆍ혈구응집 (HA, hemagglutination)
ㆍ혈구흡착 (HAD, hemadsorption)
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2. 식품의약품안전처(MFDS), ICH, FDA, EMA, WHO 등 규제기관의
가이드라인에 따라 검증시험 수행
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3. 시험 완료 후 사후관리
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In vivo assay
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시험소개
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In vivo assay는 외래성 및 내인성 바이러스 검출을 위한 시험 법으로 성숙마우스(adult mice), 젖먹이마우스(suckling mice), 유정란(embryonated chicken eggs) 접종 시험이 있다.
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적용범위
다음과 같은 검사물질에 대하여 감염성 인자에 의한 오염이 없음을 검증하는 품질평가시험분석 결과를 요구한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ기타
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제공서비스
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1. 외래성 바이러스 부정시험 (동물 접종시험) 서비스
ㆍ성숙마우스 접종시험 (Inoculation of adult mice)
ㆍ젖먹이마우스 접종시험 (Inoculation of suckling mice)
ㆍ부화란 접종시험 (Inoculation of embryonated chicken eggs)
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2. 식품의약품안전처(MFDS), ICH, FDA, EMA, WHO 등 규제기관의
가이드라인에 따라 검증시험 수행
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3. 시험 완료 후 사후관리
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Other viruses test (Detection of species-specific viruses by real-time PCR)
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시험소개
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Real-time PCR 기반의 바이러스 부정(검출) 시험 법은 외인성 및 내인성 바이러스를 신속, 정확하게 검출할 수 있다.
바이러스 부정(검출) 시험은 ‘ICH 가이드라인, Q2(R1)’에 따라 검증된 시험 방법 또는 논문에 따라 수행한다.
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적용범위
다음과 같은 검사물질에 대하여 감염성 인자에 의한 오염이 없음을 검증하는 품질평가시험분석 결과를 요구한다.
ㆍ마스터 세포은행 (MCB, master cell bank)
ㆍ제조용 세포은행 (WCB, working cell bank)
ㆍ생산종결세포 (EOPC, end of production cells)
ㆍ공정을 거치지 않은 원료 (Unprocessed Bulk)
ㆍ마스터 바이러스 시드 (MVS, master virus seed)
ㆍ제조용 바이러스 시드 (WVS, working virus seed)
ㆍ원료 물질 (Raw material)
ㆍ최종제품 (Final products ; Production lot release)
ㆍ기타
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제공서비스
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1. 외래성 바이러스 검출(부정)시험 (Real-time PCR) 서비스
ㆍHuman viruses
- HIV-1 (Human immunodeficiency virus type 1)
- HIV-2 (Human immunodeficiency virus type 2)
- HTLV-1 (Human T-cell lymphotropic virus type 1)
- HTLV-2 (Human T-cell lymphotropic virus type 2)
- HAV (Hepatitis A virus)
- HCV (Hepatitis C virus)
ㆍBovine viruses
- BAdV (Bovine adenovirus)
- BPV (Bovine parvovirus)
- BRSV (Bovine respiratory syncytial virus)
- BRABV (Bovine rabies virus)
- BTV (Bluetongue virus)
- BVDV (Bovine viral diarrhea virus)
- BHV (Bovine herpesvirus)
ㆍPorcine viruses
- PRV (Pseudorabies virus)
- PPV (Porcine parvovirus)
- TGEV (Transmissible gastroenteritis virus)
- PAdV (Porcine adenovirus)
- PCV (Porcine circovirus)
- PHEV (Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus)
- PEDV (Porcine epidemic diarrhea virus)
ㆍOther viruses
- MVM (Minute virus of mice)
- Reo-3 (Reovirus type 3)
- RVLP (Retrovirus-like particles)
- 기타 바이러스 검출 협의 가능
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2. 식품의약품안전처(MFDS), ICH, FDA, EMA, WHO 등 규제기관의
가이드라인에 따라 검증시험 수행
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3. 시험 완료 후 사후관리
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